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产品简介

本产品含双封闭法BioDee Top Taq热启动酶、优化的双阳离子缓冲液、SYBR Green Ⅰ荧光染料、dNTPs、PCR 增强剂、 PCR 稳定剂。本产品浓度为 2×，使用时只需加入模板、引物和水，即可进行反应。
本产品使用的双封闭法 BioDee Top Taq 热启动酶，具有极高活性和特异性，能够获得高质量测定数据。

试剂盒组成

需要而未提供的器材
1. 系列可调节量程移液器及吸头
2. 干净的试管、离心管及 PCR 八联管或 96 孔板
3. 实时荧光定量 PCR 仪（适用于无需 ROX 荧光染料校正的仪器）

储存条件
-20℃储存， 保质期 12 个月。

注意事项
1. BioDee SYBR Green qPCR SuperMix（2×） 使用前冰浴化冻，彻底化冻并混合均匀后使用。
2. 本产品仅限专业人员用于科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明
1. 请按下表配制 qPCR 反应体系

注：对于 mRNA 的定量测定，请检测 GAPDH、 β-actin 或 β-tubulin 等管家基因做内参，为了节省试剂，可以将反应体系缩减为 20 或 25 μl 反应体系。
2. 完成反应体系配制后，将装有试剂的八联管或 96 孔板放入 qPCR 仪中，按以下程序进行 qPCR 测定。

待测定反应完成，一方面记录各样品的循环阈值（Cycle threshold, Ct），另一方面注意观察产物熔解曲线（Melt Curve）是否是尖锐的单峰及熔解温度（Tm）是否接近引物设计时的预测温度，以确定扩增反应的特异性。

数据处理
qPCR 对模板的定量主要是通过 Ct 值来确定，模板数量越多， Ct 值越小,模板数量越少， Ct 值越大。对于病毒、细菌或真菌核酸定量，可以通过标准品来进行绝对定量；对于人及动物细胞 mRNA 的定量，可以利用内参基因来进行相对定量。

参考文献
1. P. Smyth, O. Sheils, C. Martin, J. O’Leary, E. C. Sweeney, 2001. Real-time quantitative analysis E-cadherin
expression in ret/PTC-1-activated thyroid neoplasms. Int J Surg Pathol. 9 (4): 265-272.
2. L. Simoncini, M. Casiraghi, C. Bazzocchi, L. Sacchi, C. Bandi, C. Genchi, 2001. Real-time PCR for
quantification of the bacterial endosymbionts (Wolbachia) of filarial nematodes. Parassitologia. 43 (4):173-178.