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产品简介
细胞凋亡是细胞的基本生理活动之一，在机体胚胎发育、免疫系统成熟、组织修复和内环境稳定等方面发挥十分重要的作用。 Annexin V 是一种分子量为 35.8 KD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能够与凋亡过程中从细胞膜内翻转到细胞膜外的的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）高亲和力和高特异性结合。利用异硫氰酸荧光素标记的 Annexin V（Annexin V-FITC）结合到 PS 上，在蓝色光的激发下，发出绿色荧光，可以区分凋亡细胞和正常细胞。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和坏死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。将 Annexin V-FITC 与 PI 联合使用，利用流式细胞仪或荧光显微镜检测可以将凋亡早期细胞与凋亡晚期细胞及坏死细胞区分开来（由于流式细胞仪具有更高的检测灵敏度，推荐使用流式细胞仪检测）。

试剂盒组成

需要而未提供的材料
1. 细胞
2. 超纯水和细胞培养用 PBS
3. 系列可调节量程移液器及吸头
4. 干净的试管、离心管及组织培养板
5. 台式离心机、流式细胞仪
储存条件
4 ℃避光储存， 保质期 12 个月。

注意事项
1. 初次使用试剂盒时，小体积液体试剂请适当离心后使用。
2. 流式细胞测定时，注意设置不染色对照样品、 Annexin V-FITC 和 PI 单染样品，设置仪器参数。
3. 本产品仅限专业人员用于科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明
1. 收集经过各种干预因素处理的待测细胞，调整细胞浓度至 5×105-1×106个/ml，取 1 ml 细胞悬液，4℃,250g
离心 5 分钟，弃上清。
2. 加入 1ml 冰浴预冷的 PBS，轻轻振荡使细胞悬浮， 4℃,250g 离心 5 分钟，弃上清。
3. 加入 250 μl Binding Buffer (提前用纯水稀释为 1×)重悬细胞，然后加入 5 μl Annexin V-FITC，轻轻混匀，避光室温反应 15 分钟。
4. 加入 5 μl PI，轻轻混匀，避光室温反应 5 分钟。
5. 加入 250 μl Binding Buffer (1×)，利用流式细胞仪 FITC 和 PI 通道检测细胞凋亡。

数据处理
检测完成后可以直接利用流式细胞仪自带软件处理数据，生成 PDF 文件，然后截屏需要的流式细胞图，
并对凋亡细胞比例进行统计分析；另外可以保存 FCS 文件，利用 Flowjo 等流式数据处理软件对流式细胞
图进行处理，如下图所示。

参考文献
1. M. Vogler, H. A. Hamali, X. M. Sun, et al. 2011. BCL2/BCL-XL inhibition induces apoptosis, disrupts cellular calcium homeostasis, and prevents platelet activation. Blood, 117: 7145-7154.