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产品简介
一氧化氮检测试剂盒（Nitric Oxide Assay Kit）是一种灵敏简单的检测一氧化氮的试剂盒。生物机体内有三种一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase, NOS）。一氧化氮合酶催化 L-精氨酸产生一氧化氮，发挥复杂的生理功能。
一氧化氮产生之后，会被迅速代谢为硝酸盐和亚硝酸盐，本试剂盒利用经典的 Griess 试剂对亚硝酸盐进行定量测定来间接测定细胞释放的一氧化氮。
本试剂盒以亚硝酸钠为标准品，检测线性范围为 3.12-200 μM，灵敏度≤3.12 μM。
本试剂盒能够检测动物细胞培养上清和血浆中的一氧化氮。
试剂盒组成

需要而未提供的试剂及器材
1. 超纯水
2. 系列可调节量程移液器及吸头
3. 干净的试管、离心管及 96 孔板
4. 酶标仪
储存条件
4 ℃储存，保质期 12 个月。
注意事项
1. 每次测定时利用标准品制作标准曲线。
2. 本产品仅限专业人员用于科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

3. 本试剂盒中 NaNO2对人体有一定毒性， 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
测定前准备
1. 样品的准备
1.1 细胞培养上清的准备：将处于对数生长期的细胞接种到 96 孔板中，然后加入刺激剂刺激一定时间后（贴壁细胞待细胞贴壁后加刺激剂），收集细胞，室温 300g 离心 5 分钟（贴壁细胞直接取上清），取上清用于一氧化氮测定。
1.2 血浆样品的准备：取新鲜抗凝血液， 600g 离心 10 分钟，上清为血浆。取上清用于一氧化氮测定。
2. 标准品的准备
在 1.5 ml 离心管中，加入 990 μl 纯水，再取 10 μl 的 20 mM 浓度 NaNO2 标准品加入离心管中配制 200μM 浓度NaNO2标准品；然后取另外 6 根 1.5 ml 离心管，分别加入 500 μl 纯水，再吸取 500 μl 的 200 μM浓度 NaNO2 标准品依次倍倍稀释为 100、 50、 25、 12.5、 6.25、 3.12 μM 浓度。
测定方法
1. 参考下表，使用透明 96 孔板，依次加入标准品或样品、 Griess Reagent Ⅰ和 Griess Reagent Ⅱ后，混
匀， 室温孵育 5 分钟。

2. 待反应完成后，利用酶标仪测定 A540nm。
注：务必保证 Griess Reagent Ⅰ和 Griess Reagent Ⅱ加入顺序正确；如果样品中一氧化氮浓度偏低，可加倍加入待测样品，将标准品同样加倍并降低 1 个浓度梯度进行测定。
数据处理
利用标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标制作标准曲线，并获得横纵坐标之间的函数关系式，然后利用标准曲线和各样品的吸光度值计算样品中一氧化氮浓度。一氧化氮标曲测定如下图所示：

参考文献
1. S. Moncada, 1992. The L-arginine: nitric oxide pathway. Acta Physiol. Cand. 145: 201-227.
2. C. Nathan, 1992. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells. FASEB Journal. 6: 3051-3064.

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