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Biozol总RNA提取试剂
  • 产品货号:
    BN20537
  • 中文名称:
    Biozol总RNA提取试剂
  • 品牌:
    Biorigin
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • BN20537-100ml

    100ml

    ¥400.00

产品描述

保存:4℃避光保存,保质期 12 个月。 

产品简介:

     本试剂是一种通用的总 RNA 提取试剂,适用于动植物细胞或组织及细菌的总RNA 抽提,可有效防止 RNA 在提取过程中的降解。获得的 RNA 可直接用于 Northern 杂交,纯化 mRNA,体外翻译,RNase 保护实验,RT-PCR 以及cDNA 克隆等一系列操作。该试剂可用于 100 次总 RNA 提取(10 平方厘米细胞或 100mg 组织)。

操作说明:自备新开封或专用氯仿、异丙醇、75%乙醇、DEPC处理水

1、细胞裂解或组织匀浆:

1)贴壁细胞:吸尽培养液,每 10 平方厘米(6 孔板孔或 35 mm 平皿)细胞加入 1 ml Biozol,使其覆盖培养细胞, 再用吸管或加样器吹打 2~3 次,细胞应完全裂解,然后转移至离心管中。 

2)悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,每五百万至一千万(5×106-1×107)动植物或酵母细胞,或一千万 (1×107) 细菌,加入 1ml Biozol 。用吸管或加样器吹打,使其完全裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分,可用匀浆器匀浆,以确保其完全裂解。转移至离心管中。

3)组织:先将组织剪切成小块,放入玻璃匀浆器内。冷冻组织可在研钵中研磨匀浆。每 50-100mg 组织加入 1ml Biozol ,匀浆至完全裂解。转移至离心管中。

   裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。室温放置 5 分钟。对于多糖、蛋白等杂质丰富的组织样品,匀浆后仍会存留有不溶物质,可 12000g 4℃离心 10 分钟,然后吸取上清至一新的离心管中。

2. 分离:在装有裂解物的离心管中加入 0.2 倍体积的氯仿(1 ml Biozol 加入 0.2 ml 氯仿),振荡器上充分振荡 混匀 30 秒,室温放置 2-3 分钟。12000g 4℃离心 10 分钟,然后吸取含总 RNA 的上层水相至一新的离心管中,每 毫升 Biozol 约可吸取 0.5-0.6 ml。有机相和中间层含有 DNA 和蛋白质,应避免触及。 

3. 沉淀:按每毫升 Biozol 加入 0.5 ml 异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀 10 分钟。12000g 4℃离心 10分钟,在 管底可见 RNA 沉淀。弃上清,按每毫升Biozol 加入 1 ml 75%乙醇,轻轻颠倒混匀,以清洗RNA 沉淀。12000g  4℃离心 2 分钟,弃去液体,小心勿丢弃 RNA 沉淀。室温倒置晾干 5~10 分钟。 

4. 溶解:加入适量 DEPC 处理水使 RNA 沉淀溶解。存放于-80℃。

注意事项:

1,RNA 提取过程中所用器皿、离心管、吸头等应保证无污染无 RNA 酶。操作中应小心,防止外源性 RNA 酶污染样品导致 RNA 样品降解。 

2,试剂中含有酚等有害物质,注意个人防护。